基金目：中國石油化工集團公司資助項目（J100010）。

　　隨著潤滑油的廣泛使用，其生物毒性對環(huán)境的影響越明顯。礦物潤滑油對地下水的污染影響可達100年，撤量礦物油會阻礙植物的生長和毒害水生生物，約0.1Jig/g的礦物油即可使水生殼類生物減壽20%m.因此，有必要研究潤滑油的生物毒性。

　　我國在1995年頒布了《水質(zhì)急性毒性的測定??發(fā)光細菌法》，但其適用范圍只限于在水中可溶性化學物質(zhì)的水質(zhì)急性毒性監(jiān)測。對于較難溶于水的試驗物質(zhì)，也有學者采用增溶劑或超聲波技術(shù)等方法增溶；但這些方法可能會改變試驗物質(zhì)的自然性質(zhì)，并導致非代表性的生態(tài)毒性關(guān)系。美國ASTM于1998年公布了“潤滑油毒性測試：樣品液制備方法的標準”。國內(nèi)外一些學者有采用此標準制備樣品液，用珊湖蟲、章魚仔、海蝸牛、水螅等海生生物研究原油和石油產(chǎn)品的生物毒性。這些海洋生物對石油類物質(zhì)的生物毒性耐受性較強，試驗時間相對較長，成本較篼。

　　本文參照國內(nèi)、外的相關(guān)標準，建立了一套利用發(fā)光細菌檢測潤滑油急性毒性的試驗方法，并成功地檢測出各種潤滑油的急性生物毒性大小。

　　1試驗原理、試驗設(shè)備和試驗方法1.1試原理發(fā)光細菌急性毒性試驗亦稱Microtax生物毒性試驗，它以明亮發(fā)光桿菌（photobacteriumphosphoreum）作指示生物，以其發(fā)光強度的變化為指示，測定環(huán)境中有害有毒物質(zhì)的生物毒性。當有毒有害物質(zhì)與發(fā)光細菌接觸時，發(fā)光強度立即改變，并隨著毒物濃度的增加而發(fā)光減弱。這種發(fā)光強度的變化，可用精密測光儀器定量測定。

　　1.2試驗菌種和試驗儀器選用明亮發(fā)光桿菌T3小種作為菌種。發(fā)光細菌的制備有2種方法：一種是發(fā)光細菌新鮮菌懸液的制備，另一種是發(fā)光細菌凍干粉復蘇法其中凍干粉復蘇法是國家標準方法，其優(yōu)點是可實行質(zhì)量控制，凍干粉可長期保存方便使用，操作簡便，節(jié)約時間本文試驗采用凍干粉復蘇法，菌種由中國科學院南京土壤研究所提供。

　　測光儀器選用國產(chǎn)DXY-2型生物毒性測試儀（中國科學院南京土壤研究所儀器廠生產(chǎn)），其工作原理如所示1.3試方法由于潤滑油在自然條件下很難溶于水，因此本文采用半數(shù)效應(yīng)載荷（medianeffectload，ELW）作為潤滑油在水中生物毒性的判定指標，并采用載荷率（loadingrate，加人的試驗材料與含水介質(zhì)之比）來衡童潤滑油與水的量化關(guān)系。

　　為了模擬自然條件下潤滑油的典型污染情況，本文參照美國ASTM6081-98標準中的樣品制備方法準備樣品液，使用水融合組分（wateraccommodatedfraction，WAF）方法制備試驗樣品液。

　　WAF溶液的制備如和所示。攪拌櫸應(yīng)該以適當?shù)乃俣冗\轉(zhuǎn)，以保證液面旋渦的深度為WAF溶液制備容器中試驗溶液高度的10% ~35%.攪拌時應(yīng)注意旋轉(zhuǎn)速度，不要把試驗材料向下拉到容器的底部，并且攪拌速度不要過快，以免產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。

　　在制備WAF溶液時，為了使?jié)櫥秃退芤撼浞秩诤?，需要一定的攪拌時間隨著攪拌時間的延長，水中油的含童增加，但增加量逐漸平緩根據(jù)Gir-ling的建議，一般需要攪拌20~24h.攪拌后，應(yīng)沉淀1~2h因為本文選用的試驗生物是海生發(fā)光細菌，這種發(fā)光細菌需要在含鹽水溶液中生存，因此，將加有3%NaCl的蒸餾水作為準備WAF中的水溶液和稀釋水溶液。

　　采用發(fā)光細菌凍干粉復蘇法制備試驗用發(fā)光細菌液，并測定標準毒物化汞（HgCl）的￡（值是否在0.1±0.02mg/L的范圍內(nèi)，以檢測制備的發(fā)光細菌液是否合格。

作者：佚名　　來源：中國潤滑油網(wǎng)